Учебно-методическое пособие Дисциплина- «Микробиология»
Скачать 2.13 Mb.
|
Рекомендуемая литература [1] c.44-61,[2] c.62-71 ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 5 ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ МИКРООРГАНИЗМОВ.
При составлении питательных сред необходимо учитывать потребность микроорганизмов в элементах питания. По составу среды подразделяют на естественные (натуральные) и синтетические. Состав натуральных сред очень сложен и непостоянен, существенно колеблется в зависимости от сырья и способа приготовления сред. Это заметно влияет на рост микроорганизмов. Естественные среды используют главным образом для поддержания культур микроорганизмов, накопления их биомассы и диагностических целей. Синтетические среды содержат в своем составе известные химически чистые вещества в строго указанных концентрациях. Синтетические среды широко используются для исследований, связанных с изучением обмена веществ микроорганизмов. Существуют также полусинтетические среды, относящиеся к средам с неопределенным химическим составом. В них на ряду с соединениями известной химической природы входят вещества неопределенного состава. Эти среды широко используются в микробиологической практике для получения витаминов, антибиотиков, аминокислот и других продуктов жизнедеятельности микроорганизмов. 5.3. Практическая часть Приборы, реактивы, посуда: йодный раствор (1 г йодистого калия растворить в 5 мл воды, к полученному раствору добавить 1 г йода и довести объем смеси дистиллированной водой до 300 мл), колбы для приготовления сред, стеклянные палочки, набор минеральных солей, глюкоза, пептон , желчь, водяная баня, весы, шпатель, термометр, фарфоровая чашка, пипетка, сахариметр, бумажные фильтры, агар-агар, полотно, вата. 5.3.1.Методика выполнения работы Приготовление картофельной среды. Нарезать в химический стакан на 150 мл ломтиками 20 г очищенного, промытого водой картофеля, залить 100 мл водопроводной воды, варить 30 минут. Отвар фильтровать через бумажный фильтр и добавить воду до первоначального объема. К полученной жидкости добавить 2 г агар-агара, кипятить до его растворения и установить нейтральную реакцию среды (рН 7). Среду стерилизуют 20 минут при 1 атм. Приготовление сусла. Зерно ячменя замачить в холодной воде и прорастить при 35°С . После того, как ростки станут вдвое больше, чем длина зерна, зерно высушивают до воздушно-сухого состояния и получают солод. Для приготовления сусла солод крупно размалывают и 250 г его берут на 1 л воды. Для лучшего выделения фермента амилазы смесь подогревают при 57°С до прекращения окрашивания раствора при добавлении йодного раствора (йодная проба на содержание крахмала). Пробы на содержание крахмала проводят в фарфоровой чашке в капле жидкости. Сусло процедить через полотно, полученный фильтрат нагреть до кипения и кипятить 5 – 10 минут, затем фильтровать через бумажный фильтр. Такое сусло содержит 10 – 20% сахара. Точное его содержание определяют по плотности раствора при помощи сахариметра. Сусло разбавить водой до концентрации сахара 6 – 8% и стерилизовать при 115°С и давлении 0,5 атм. 30 минут. Приготовление сусло-агара. К приготовленному суслу добавить 2% агара, кипятить до расплавления агара, фильтровать через полотно и стерилизовать таким же способом, как сусло. Приготовление молочно-солевого агара. Мерным цилиндром отмерить 100 мл 2% стерильного агара, содержащего 6,5% хлорида натрия. Добавить к нему 10 мл обезжиренного стерильного молока. Приготовление среды Кесслера. Отмерить 1 л водопроводной воды, прибавить 10 г пептона и 50 мл желчи. Смесь прокипятить при помешивании в течение 20 – 30 минут на водяной бане. Затем профильтровать через слой ваты. В полученном фильтрате растворить 2,5 г глюкозы и довести объем до 1 л, рН среды довести до значения 7,4 – 7,6. Добавить 2 мл 1% водного раствора кристаллического фиолетового. Среду разлить в прбирки с поплавками и стерилизовать при давлении 0,1 атм. В течение 10 минут.Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый цвет. Приготовление дрожжевых сред. Дрожжевой экстракт. 100 г прессованных дрожжей развести в 100 мл воды, смесь кипятить 1 ч, трижды фильтровать через бумажный фильтр и стерилизовать 30 минут при 115°С. Дрожжевая вода. 5 г сухих дрожжей размешать в 100 мл воды , кипятить 10 минут, фильтровать через бумажный фильтр и стерилизовать по 30 минут текучим паром ежедневно в течение 3 суток. Приготовление среды Чапека. Взять навески 2 г глюкозы, 0,2 г NaNO3, 0,1 г K2HPO4, 0,05 г MgSO4, 0,05 г KCL, 0,01 г FeSO4, вода дистиллированная 100 мл. 5.3.2. Оформление работы. Написать отчет о проделанной работе. 5.4.Контрольные вопросы.
Рекомендуемая литература [1]c.61-75,[2]c.106-114 ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 6 ПРИГОТОВЛЕНИЕ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХ СРЕД ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ. 6.1. Цель работы: приобретение навыков культивирования микроорганизмов.
С.Н. Виноградским в практику микробиологии введены элективные (избирательные) среды, предназначенные для определенных групп микроорганизмов. Такие среды обеспечивают преимущественное развитие одного вида или группы родственных микроорганизмов и менее пригодны или совсем непригодны для развития других. Зная физиологические особенности соответствующей группы микробов, можно подобрать такие условия культивирования (состав, активную кислотность среды, условия аэрации, температуру и так далее), при которых будут развиваться лишь представители данной группы. Элективные среды позволяют вести биологические процессы в лаборатории и на производстве без предварительной стерилизации среды. Эти среды применяют главным образом для выделения микроорганизмов из мест их естественного обитания и получения накопительных культур. Понятие «элективные среды» входит в более широкое понятие «элективные условия». Дифференциально-диагностические среды дают возможность быстро отличить одни виды микроорганизмов от других или выявить некоторые их особенности. Примером индикаторной среды для выявления бактерий из группы кишечной палочки в естественных субстратах может служить агаризованная среда Эндо. 6.3. Практическая часть Среда Эндо имеет следующий состав, г: пептон – 10, лактоза – 10, K2HPO4 - 3,5, NaHSO3 – 2,5, агар – 150, вода дистиллированная – 1000, рН 7,4. К среде добавляется 4 мл 10% спиртового раствора основного фуксина. Бактерии из рода Escherichia на этой среде образуют малиновые колонии с металлическим блеском. При определении видовой принадлежности бактерий используют рН-индикаторные среды, в состав которых входит один из индикаторов – нейтральный красный (0,0005%), феноловый красный (0,005%) , бромтимоловый синий (0,0005%). Если развитие микроорганизма сопровождается образованием кислоты или щелочи, цвет индикатора изменяется. Дифференциально-диагностические среды особенно широко применяют в санитарной и медицинской микробиологии для быстрой идентификации определенных групп микроорганизмов. Приборы, реактивы, посуда: колбы для приготовления сред, химические стаканы на 100 мл, стеклянные шпатель, термометр, пипетка, бумажные фильтры, набор минеральных солей, глюкоза, среда Эндо в порошке, бактериологические петли. 6.3.1.Методика выполнения работы Приготовление глюкозо-аммонийной среды для культивирования дрожжей. В колбе на 100 мл приготовить среду следующего состава, г: глюкоза – 2,0, (NH4)2SO4 – 0,5, KH2PO4 – 0,08, K2HPO4 – 0,02, MgSO4 – 0,05, NaCl – 0,01, CaCl2 – 0,01, вода водопроводная – 100 мл. Приготовление среды Эндо. Среду приготовить в химическом стакане на 100 мл по прописи указанной на этикетке. После охлаждения среды до 50°С разлить в чашки Петри. После приготовления питательных сред произвести посев микроорганизмов на эти среды. Посев на плотные среды. Самым частым методом посева культуры микроорганизмов является посев на чашку Петри с агаризованной средой. Посев культуры осуществляется одним из трех способов:
Посев проводят непосредственно около зажженной горелки, в пламени которой стерилизуется петля. Быстро переносят петлю с взятым материалом в чашку Петри с питательной средой приоткрыв крышку. Затем закрывают крышку чашки Петри, а петлю тщательно прокаливают на пламени и ставят в штатив. Записанную чашку Петри подписывают, указав название посевного материала и дату посева. После этого ставят чашку Петри в термостат крышкой вниз. При посеве на плотные среды нужно следить, чтобы не поцарапать среду петлей. Техника посева на жидкие среды в основном такая же. Отличительные особенности посева на жидкие среды:
6.3.2. Оформление работы. Написать отчет о проделанной работе.
Рекомендуемая литература [1] c.61-75, [2] c.106-114 ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 7 ПОЛУЧЕНИЕ НАКОПИТЕЛЬНОЙ КУЛЬТУРЫ МИКРООРГАНИЗМОВ. 7.1. Цель работы: приобретение навыков получения накопительной культуры микроорганизмов.
При изучении физиолого-биохимических особенностей и цикла развития микроорганизмов, а также для установления их видовой принадлежности необходимо работать с чистой культурой микробов. Выделение чистой культуры включает три этапа: получение накопительной культуры, выделение чистой культуры, определение ее чистоты. Для получения накопительной культуры определенного вида бактерий сначала подбирают элективные условия среды, предложенные Виноградским С.Н. , обеспечивающие преимущественное развитие данных бактерий. Затем из мест обитания, в которых преобладают представители данной группы, делают посев на соответствующую элективную среду. 7.3. Практическая часть Приборы, реактивы, посуда: колбы для приготовления сред, химические стаканы на 100 мл, стеклянные шпатель, термометр, набор минеральных солей, глюкоза, пробирки. 7.3.1.Методика выполнения работы Приготовить среды для получения накопительных культур: 1.среда для анаэробов (среда Виноградского). Состав среды, г глюкоза - 0,2,K2HPO4 – 0,1, ,MgSO4 – 0,05, NaCl – 0,05, MnSO4 , FeSO4 - следы , CaCO3 – 2,0, вода – 100 мл. Среду налить в пробирки, закрыть ватными пробками, внести небольшое количество почвы и пастеризовать 10 минут при температуре 80°С. Затем поставить пробирки в термостат при температуре культивирования 30°С. 2. накопительная культура аэробных спорообразующих бактерий. Нарезать клубень картофеля на мелкие ломтики, поместить их в колбу, добавить на кончике шпателя мел, залить небольшим количеством воды, закрыть ватной пробкой и прогреть на кипящей водяной бане в течение 15 минут. Вегетативные клетки и споры большинства бактерий, находящихся на поверхности клубней картофеля погибнут. Жизнеспособными останутся только споры бактерий Bacillus. Температура культивирования 30°С. 7.3.2. Оформление работы. Написать отчет о проделанной работе.
Рекомендуемая литература [1] c.61-75, [2] c.106-114 ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 8. ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ МИКРООРГАНИЗМОВ. 8.1. Цель работы: приобретение навыков обнаружения физиолого-биохимических свойств микроорганизмов.
При изучении физиолого-биохимических признаков микроорганизмов исследуют: отношение их к источникам углерода и азота, продукты жизнедеятельности, накапливающиеся в среде (кислоты, спирты, газы), отношение к кислороду, щелочам и другим факторам внешней среды, способность продуцировать антибиотические вещества, в ряде случаев определяют чувствительность микроорганизмов к тем или иным антибиотикам. Для обнаружения физиолого-биохимических свойств бактерий пользуются посевом их на дифференциально-диагностические среды (жидкие и плотные), содержащие вещества, в отношении которых микробы способны проявлять свою химическую (ферментативную) активность. Результат реакции определяется при помощи добавляемых в питательную среду различных индикаторов, дающих в большинстве случаев цветные реакции. Поэтому метод посева на дифференциально-диагностические среды получил название посева на «пестрый ряд». 8.3. Практическая часть При использовании микроорганизмами источников углерода, в частности углеводов, продуктами их жизнедеятельности нередко бывают газы, кислоты и спирты. Для обнаружения газов применяют посев уколом в агаровую среду в пробирки. При появлении газов столбик агар-агара разрывается. Используют также жидкую среду с перевернутыми вверх дном поплавками. Поплавок представляет собой небольшую узкую пробирку (0,5×3-4 см). Его опускают вверх дном в обычную пробирку с жидкой средой, которая при стерилизации заполняет поплавок. При развитии микроорганизмов, образующих газы, последние вытесняют жидкость из поплавка. Образование кислот при посеве на средах, содержащих углеводы, устанавливают при помощи индикатора бромтимолблау, а их количество – по титрованию 0,1 н. раствором щелочи. При наличии мела кислоты связываются в кальциевые соли, которые можно обнаружить добавлением к 5 мл среды 1 мл концентрированного раствора оксалата аммония. В присутствии кислот (например, уксусной) выпадает белый осадок. Образование спирта определяют при отгоне части субстрата с последующей пробой на спирт (реакция на появление йодоформа). Продуктами жизнедеятельности микроорганизмов на доступных источниках азота часто бывают : аммиак (проба с реактивом Несслера), сероводород и меркаптан (проба с фильтровальной бумагой, смоченной ацетатом свинца), индол (проба с азотистой кислотой), нитрит (проба с цинк-йод-крахмалом в кислой среде). Редуктазную способность культур выявляют обесцвечиванием метиленового синего. |
Похожие:
 | Федеральными государственными требованиями к минимуму содержания и уровню подготовки выпускников по |  | Учебно-методическое пособие предназначено для подготовки тьюторов, стажеров, руководителей и педагогических работников школ |
| Учебно-методическое пособие предназначено для студентов 2-3 курсов педиатрического факультета кгму | | ... |
| Учебно-методическое пособие предназначено для преподавателей и студентов ифжимк юфу | | Учебно-методическое пособие по курсу «Организационное поведение» /Д. М. Сафина. – Казань: Казанский (Приволжский) федеральный университет;... |
| Предгорненское районное местное отделение Общероссийского общественного благотворительного фонда | | Нимгирова А. С., Кульков В. Н., Набережная Ж. Б., Набережная И. Б. Организационно-теоретические аспекты экспертизы временной нетрудоспособности... |
| Учебно-методическое пособие для студентов, ординаторов и интернов, курсантов факультетов повышения квалификации | | Г12 Экономика отрасли (Экономика дорожного строительства): учебно-методическое пособие [Текст] / сост. В. В. Гавриш, Е. В. Гуторин.... |