Из порошковых концентратов требуется выделение ДВ в органическую фазу жидкостной экстракцией.
Из пищевых приманок также извлекают ДВ с помощью жидкостной экстракции. При этом из-за низкого уровня содержания ДВ (3 - 10%) в пищевых приманках на фоне сложного рецептурного состава и пищевой основы повышаются требования к селективному выделению ДВ и условиям эффективного хроматографического разделения компонентов пробы.
Метод избирателен. Определению бродифакума, бромадиолона, дифетиалона, зоокумарина, куматетралила, флокумафена не мешают технологические примеси в техническом продукте.
Приборы. Аналитический жидкостный хроматограф "Стайер" или другого типа, снабженный спектрофотометрическим детектором на диодной матрице или детектором для измерений при одной длине волны в ультрафиолетовой области спектра, термостатируемой колонкой, изократической системой микронасосов, инжектором типа "Реодайн" (или другого типа) с дозирующей петлей объемом от 5 до 20 мкл, программой управления оборудованием и обработки хроматографических данных на базе персонального компьютера.
Хроматографическая колонка, как правило, заводского заполнения сорбентом, с соответствующей предколонкой. Микрошприц вместимостью 100 - 250 мкл для ручного ввода пробы в инжектор и промывки инжектора. Фильтрующее устройство с фильтром 0,45 мкм. Ультразвуковая ванна для дегазации элюентов и подготовки пробы. Общелабораторное оборудование (аналитические весы с точностью взвешивания до 0,1 мг, мерная стеклянная посуда).
Реактивы и растворы. Ацетонитрил градации для жидкостной хроматографии
(210 - 230 нм); уксусная кислота х.ч.; вода бидистиллированная или очистки
супер-q на оборудовании "Миллипор". Сорбенты для прямофазной и
обращенно-фазной хроматографии типа сепарон SGX NH , лихросорб NH , MAX RP
2 2
C12, зорбакс ODS, лихросорб RP 18 и др.
Элюент (подвижная фаза) - ацетонитрил:вода в соотношении 80:20 (по объему); ацетонитрил:вода:уксусная кислота в соотношении 80:20:1 (по объему), дегазированные перед использованием с помощью ультразвуковой ванны или потока гелия.
Выполнение анализа. Точную навеску технического продукта 0,05 г или аналитического стандарта определяемого вещества растворяют в мерной колбе вместимостью 50 - 100 мл в соответствующем органическом растворителе (ацетонитрил, этиловый спирт и др.) с помощью ультразвуковой ванны, затем проводят последовательное разбавление исходного раствора ацетонитрилом или элюентом (из расчета получения концентрации в рабочей градуировочной смеси и испытуемом растворе 0,010 - 0,005 мг/мл) и хроматографируют в условиях прямофазной или обращенно-фазной высокоэффективной хроматографии. Из полученных хроматограмм рабочей градуировочной смеси определяют время удерживания и площадь хроматографического пика определяемого вещества в рабочей градуировочной смеси. Из хроматограмм испытуемой пробы проводят идентификацию определяемого вещества по совпадению времени удерживания и вычисляют площадь хроматографического пика в испытуемой пробе. Применение диодно-матричного детектора позволяет записать и сравнить спектры поглощения хроматографического пика определяемого вещества в диапазоне 190 - 400 нм в рабочей градуировочной смеси и испытуемой пробе. Близким характером спектров поглощения характеризуются зоокумарин и куматетралил, бродифакум и бромадиолон.
Условия хроматографирования при прямофазной и обращенно-фазной высокоэффективной хроматографии приведены в табл. 4.7.
Таблица 4.7
┌───────────────────────┬───────────────────────┬─────────────────────────┐
│ Параметры │ Прямофазная │ Обращенно-фазная │
│ │ высокоэффективная │ высокоэффективная │
│ │ хроматография │ хроматография │
├───────────────────────┼───────────────────────┼─────────────────────────┤
│Подвижная фаза │Ацетонитрил:вода │Ацетонитрил:вода:уксусная│
│ │80:20 │кислота 80:20:1 │
├───────────────────────┼───────────────────────┼─────────────────────────┤
│Скорость подвижной фазы│0,5 мл/мин. │0,5 мл/мин. │
├───────────────────────┼───────────────────────┼─────────────────────────┤
│Колонка │Сепарон NH 5 мкм │Max RP (C ) 4 мкм │
│ │ 2 │ 12 │
│ │(150 x 3,3 мм) │(250 x 4 мм) │
├───────────────────────┼───────────────────────┼─────────────────────────┤
│Температура колонки │37 °C │37 °C │
├───────────────────────┼───────────────────────┼─────────────────────────┤
│Хроматографируемая доза│20 мкл │20 мкл │
└───────────────────────┴───────────────────────┴─────────────────────────┘
В указанных условиях бродифакум и бромадиолон детектируются двумя пиками стереоизомеров. Примерное относительное время удерживания действующих веществ по основному пику бромадиолона приведено в табл. 4.8.
Таблица 4.8
Действующее
вещество
|
Прямофазная
высокоэффективная
хроматография
|
Обращенно-фазная
высокоэффективная
хроматография
|
Дифетиалон
|
1,5
|
0,7
|
Бродифакум
|
1,4
|
0,8
|
Бромадиолон
|
1,0
|
1,0
|
Куматетралил
|
0,9
|
1,8
|
Зоокумарин
|
0,8
|
2,9
|
Обработка результатов. Вычисление массовой доли основного вещества X в процентах в техническом продукте с применением абсолютной градуировки проводится по формуле:
S x C x a x V x k
X = -----------------,
S x m
где:
S и S - площадь хроматографического пика определяемого вещества в
ргс
анализируемой пробе и рабочей градуировочной смеси;
C - массовая концентрация анализируемого стандарта определяемого вещества в рабочей градуировочной смеси, мг/мл;.
a - массовая доля действующего вещества в аналитическом стандарте, %;
V - объем раствора пробы, мл;
k - кратность разведения пробы;
m - масса средства, мг.
Определение ДВ в порошковых и жидких концентратах основано на разбавлении или экстракционном извлечении ДВ, разделении компонентов пробы в хроматографической системе сорбент - подвижная жидкая фаза (элюент) в изократическом режиме и последующем спектрофотометрическом измерении в элюате определяемого вещества с применением абсолютной градуировки.
Метод избирателен. Спектрофотометрическому измерению бродифакума, бромадиолона, дифетиалона, зоокумарина, куматетралила, флокумафена не мешают технологические и функциональные добавки, типичные для рецептурного состава концентратов: битрекс, бензоат натрия, красители (например, метиленовый голубой, красный темный) и растворители (например, этиловый и пропиловый спирт, триэтиленгликоль, пропиленгликоль).
Выполнение анализа.
Подготовка пробы. Масляный концентрат (около 0,1 г) растворяют в ацетонитриле в мерной колбе вместимостью 25 мл, затем 20 мл полученного раствора вносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и добавляют до метки элюент (смесь ацетонитрил:вода в соотношении 80:20), после перемешивания хроматографируют.
Гелеобразный жидкий концентрат (около 0,5 г) помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и растворяют в 2,5 мл диметилформамида при периодическом перемешивании или с помощью ультразвуковой ванны, затем добавляют ацетонитрил. После отстаивания 2 мл прозрачного раствора вносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и добавляют до метки элюент (смесь ацетонитрил:вода в соотношении 80:20), после перемешивания хроматографируют.
Порошковый концентрат (0,05 - 0,15 г) экстрагируют 50 мл ацетонитрила с помощью ультразвуковой ванны в течение 20 - 25 мин., затем центрифугируют и полученный раствор хроматографируют. В качестве экстрагента может быть применен также водный ацетонитрил (1:1), хлористый метилен, насыщенный муравьиной кислотой - в этом случае отгоняют экстрагент с помощью ротационного испарителя, сухой остаток растворяют в элюенте (метанол:вода:уксусная кислота в соотношении 94,2:5:0,8) и хроматографируют. При необходимости проводят сорбционную очистку экстракта от красителя на слое целита 545.
Условия хроматографирования при прямофазной и обращенно-фазной
высокоэффективной жидкостной хроматографии. Для прямофазной
высокоэффективной жидкостной хроматографии может быть использована
хроматографическая система: аминная колонка с сорбентом типа сепарон SGX
NH 5 мкм, лихросорб NH 5 мкм - элюент (ацетонитрил:вода в соотношении
2 2
80:20). Для обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии -
хроматографическая система: колонка с сорбентом типа MAX RP C12, зорбакс
ODS, нуклеосил C18, лихросорб RP 18 - (элюент ацетонитрил:вода:уксусная
кислота в соотношении 80:20:1; метанол:вода:уксусная кислота в соотношении
94,2:5:0,8 и др).
Длина волны измерений может быть применена в диапазоне от 254 до 288 нм. Скорость элюента применяется в интервале от 0,4 до 2 мл/мин., температура колонки в диапазоне 25 - 60 °C, объем хроматографируемой пробы 5 - 20 мкл.
Рабочие градуировочные смеси готовят с массовой концентрацией определяемых ДВ 0,005 - 0,010 мг/мл. Из полученных хроматограмм рабочей градуировочной смеси определяют время удерживания и площадь хроматографического пика вещества в рабочей градуировочной смеси. Из хроматограмм испытуемой пробы проводят идентификацию определяемого вещества по совпадению времени удерживания и вычисляют площадь хроматографического пика в анализируемой пробе. Для идентификации определяемого вещества дополнительно могут быть использованы спектры поглощения в области 190 - 400 нм в исследуемой пробе и градуировочной смеси.
Обработка результатов. Массовую долю ДВ в концентрате определяют по известной формуле при применении абсолютной градуировки.
Определение ДВ в дератизационных приманках основано на его экстракционном извлечении, хроматографическом разделении компонентов пробы в градиентном режиме и последующем спектрофотометрическом измерении определяемого вещества в элюате с применением абсолютной градуировки.
Метод избирателен. Спектрофотометрическому измерению бродифакума, бромадиолона, дифетиалона, зоокумарина, куматетралила, флокумафена не мешают технологические и функциональные добавки, типичные для рецептурного состава приманок: красители (например, метиленовый голубой, красный темный), битрекс, бензоат натрия и растворители (например, этиловый и пропиловый спирт, триэтиленгликоль, пропиленгликоль). Идентификацию определяемого вещества проводят сравнением времени удерживания при одной длине волны в интервале 250 - 280 нм, дополнительно могут быть использованы спектры поглощения в области 190 - 400 нм в исследуемой пробе и градуировочной смеси.
Выполнение анализа. Зерновые приманки. Навеску зерновой приманки массой 10 - 20 г экстрагируют ацетонитрилом и обрабатывают в ультразвуковой ванне в течение 30 мин. В качестве экстрагента может быть применен ацетонитрил, подкисленный уксусной кислотой (1% об.). После отстаивания отбирают аликвоту экстракта, фильтруют через фильтр 0,45 мкм и хроматографируют в градиентном режиме обращенно-фазной хроматографии. Условия хроматографирования: колонка с сорбентом нуклеосил С18 (125 x 3 мм); элюент А - ацетонитрил, элюент Б (0,16% об.) - раствор ортофосфорной кислоты. Градиент по ацетонитрилу от 40 до 75% за 10 мин.; 75% изократика 5 мин.; скорость подвижной фазы 0,4 мл/мин.; длина волны 284 нм; объем хроматографируемой дозы 10 мкл.
Гранулированные приманки. Навеску 20 - 40 г измельченной гранулированной приманки помещают в коническую колбу вместимостью 500 мл, добавляют 250 мл экстрагента и интенсивно перемешивают на магнитной мешалке в течение 20 мин. В качестве экстрагента применяют хлористый метилен, насыщенный муравьиной кислотой. Затем содержимое колбы количественно переносят на фильтр с целитом и трижды промывают экстрагентом порциями по 50 мл. Фильтрат упаривают с помощью ротационного испарителя. К сухому остатку добавляют 10 мл смеси метанол:хлористый метилен (3:2) (по объему), центрифугируют и раствор вводят в хроматограф. Условия хроматографирования: колонка с сорбентом для обращенно-фазной хроматографии зорбакс ODS 5 мкн (250 x 4,6 мм); подвижная фаза метанол:вода:уксусная кислота (94,2:5:0,8); скорость 1 мл/мин.; длина волны 254 нм; объем хроматографируемой дозы 10 мкл. Рабочая градуировочная смесь в растворителе - метанол:хлористый метилен (3:2) с концентрацией определяемого вещества 0,2 мг/мл.
Обработка результатов. Массовую долю ДВ в приманке X в процентах с применением абсолютной градуировки вычисляют по следующей формуле с учетом фактора извлечения тета:
S x C x a x V x k
гс
X = -------------------,
S x m x тета
гс
где:
S и S - площади хроматографических пиков определяемого вещества в
гс
испытуемой пробе и рабочей градуировочной смеси;
C - массовая концентрация анализируемого стандарта определяемого
гс
вещества в рабочей градуировочной смеси, мг/мл;
a - массовая доля основного вещества в аналитическом стандарте, %;
V - объем раствора пробы, мл;
k - кратность разведения раствора пробы;
m - масса пробы, взятая на анализ, мг;
тета - фактор извлечения устанавливают по контрольному образцу с
известным содержанием определяемого вещества, тета = X / X .
исп контр
4.5. Библиографические данные
1. Крейнгольд С.У. Практическое руководство по химическому анализу дезинфекционных препаратов. М., 2002. 156 с.
2. Шамб У., Сеттерфилд Ч., Вентворс Р. Перекись водорода. М., 1958. С. 460 - 468.
3. Губен-Вейль. Методы органической химии. Методы анализа. М.: Химия, 1967. С. 452 - 462.
4. Сукиасян А.Н., Копылова А.И. Количественное определение глутарового альдегида в разбавленных водных растворах//Теория и практика дезинфекции и стерилизации: Сборник научных трудов. М., 1983. С. 116 - 119.
5. Сукиасян А.Н., Свитова И.Р. Количественное определение надкислот в растворах, содержащих перекись водорода//Хим.-фарм. журнал. 1983. N 3. С. 366 - 368.
6. Сукиасян А.Н., Свитова И.Р. Модификация цериметрически-йодометрического метода анализа перекисных компонентов в растворах, содержащих надкислоту и перекись водорода//Проблемы дезинфекции и стерилизации: Сб. научн. тр. М., 1980. С. 115 - 119.
7. Газоанализатор 3.02П-Р. Руководство по эксплуатации ИРМБ. 4 133 12.005-02 РЭ. СПб, 2001.
8. Оптический анализатор озона "Циклон-5.51". Руководство по эксплуатации ИРМБ. 4 133 13.009 РЭ. СПб, 2001.
9. Мельников Н.Н., Новожилов К.Б., Белан С.Р. Пестициды и регуляторы роста растений: Справочник. М., 1995.
10. Методы определения микроколичеств пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде. М.: Колос, 1992. Т. 1, 2. N 94.
11. Гигиенические критерии состояния окружающей среды, N 94, Перметрин, ВОЗ, Женева, 1992.
12. Гигиенические критерии состояния окружающей среды, N 82, Циперметрин, ВОЗ, Женева, 1991.
13. Гигиенические критерии состояния окружающей среды, N 97, Дельтаметрин, ВОЗ, Женева, 1992.
14. Гигиенические критерии состояния окружающей среды, N 87, Аллетрины, ВОЗ, Женева, 1992.
15. Гигиенические критерии состояния окружающей среды, N 96, d-Фенотрин, ВОЗ, Женева, 1993.
|
