Посуду подсушивают (до полного высыхания) при комнатной температуре 18 - 20 °C и относительной влажности воздуха 50 - 60%, затем обрабатывают дезинфицирующим раствором.
Для разработки режимов обеззараживания посуды с остатками пищи до ее контаминации микробную взвесь смешивают с овсяной, манной или другой кашей, сваренной на молоке со сливочным маслом (к 10 г каши добавляют 1 мл 2-млрд. микробной взвеси).
Обработку столовой, чайной, лабораторной посуды и столовых приборов проводят способом погружения в дезинфицирующий раствор. Растворы готовят на питьевой воде. Температура испытуемого раствора 18 - 20 °C. При необходимости изучают эффективность растворов, имеющих температуру 50 °C.
Контролем служит аналогично контаминированная посуда, которую погружают в такой же объем стерильной питьевой воды.
Дезинфицирующий раствор должен полностью и с избытком покрыть всю посуду и приборы (из расчета не менее 2 л на 1 комплект).
Через определенные интервалы времени (например, 15, 30, 60 мин. и т.д.) извлекают из дезинфицирующего раствора по одному предмету (например, тарелка, стакан, предметное стекло, нож и т.д.) и стерильной марлевой салфеткой (размер 5 x 5 кв. см), смоченной в растворе нейтрализатора, соответствующего данному ДС, тщательно протирают зараженную часть каждого предмета, погружают салфетку в 10 мл этого же нейтрализатора, находящегося в пробирках с бусами. Время отмыва марлевой салфетки 10 мин. при постоянном встряхивании. После отмыва марлевую салфетку погружают в соответствующую жидкую питательную среду. Отмывную жидкость сеют на 2 - 3 чашки по 0,2 - 0,5 мл в каждую на твердые питательные среды.
Посевы помещают в термостат при температуре 37 °C и учитывают через 2 суток.
Время обеззараживания посуды определяют в интервале от 15 до 240 мин. в зависимости от вида тест-микроорганизма и наличия загрязнения.
Критерий эффективности обеззараживания - не менее 100%.
Время обеззараживания столовой посуды без остатков пищи, контаминированной S. aureus, E. coli, - не более 60 мин.
Время обеззараживания посуды с остатками пищи, контаминированной S. aureus, E. coli, S. typhimurium, - не более 120 мин.
Время обеззараживания лабораторной посуды, контаминированной S. aureus, E. coli, - не более 120 мин.
Время обеззараживания посуды из-под выделений, контаминированной E. coli, S. typhimurium, - не более 120 мин.
5.1.3.7. Исследование бактерицидной эффективности ДС,
предназначенных для обеззараживания выделений
Дезинфицирующие средства, предназначенные для обеззараживания выделений, должны обладать способностью гомогенизировать органический субстрат (фекалии, мокрота). Препараты, не обладающие этим свойством, для обеззараживания выделений не пригодны.
Изучение активности ДС при обработке выделений проводят с учетом их консистенции и соотношения с дезинфицирующим раствором или сухим препаратом.
В качестве тест-микроорганизмов при разработке режимов обеззараживания выделений используют S. aureus, E. coli, S. typhimurium.
Определение эффективности ДС при обработке мочи проводят следующим
образом: берут несколько пробирок, наливают в них по 9 мл мочи, прибавляют
9
по 1 мл взвеси тест-микроорганизма, содержащей 1 x 10 КОЕ/мл.
Неразведенное ДС или его растворы добавляют к моче в различных соотношениях
(равном, двойном и т.д.). По истечении времени воздействия (15, 30, 60, 90,
120 мин.) пипеткой берут 1 мл опытной смеси и переносят в нейтрализатор
объемом 9 мл, а затем из нее 1 мл смеси в пробирку с 5 мл бульона. После
тщательного перемешивания 1 мл переносят во вторую пробирку с бульоном, а
затем делают посевы по 0,1 мл на твердые питательные среды как из первой,
так и из второй пробирок. Чашки Петри с посевами ставят в термостат.
Контролем служат аналогично поставленные опыты с добавлением к моче не дезинфицирующего раствора, а стерильной водопроводной питьевой воды.
Эффективным считают ДС, обеспечивающее 100%-ную гибель тест-микроорганизмов в 6 - 8 опытах с совпадающими результатами.
Определение эффективности ДС при обработке фекалий: 20 г фекалий
растирают в ступке и добавляют 80 мл стерильной питьевой воды. Полученную
эмульсию фильтруют через двойной слой марли, разливают в пробирки по 9 мл и
9
добавляют по 1 мл взвеси тест-микроорганизмов, содержащей 1 x 10 КОЕ/мл.
Приготовленную эмульсию фекалий заливают равным или двойным количеством дезинфицирующего раствора или вносят различное количество сухого препарата. После контакта с ДС производят высевы так же, как и при обеззараживании мочи. Результаты учитывают через двое суток.
При положительных результатах проводят опыты с большим количеством оформленных фекалий (200 - 250 г). Для этого помещают их в сосуд и заливают дезинфицирующим раствором в равном или двойном количестве по отношению к весу фекалий или засыпают сухим препаратом. Затем небольшую часть фекальных масс стеклянной палочкой перемешивают с жидкостью, а остальную массу оставляют в виде небольших комочков. Через определенные промежутки времени (30, 60, 90 и 120 мин.) проводят раздельные высевы жидкой части и комочков.
Жидкую часть фекальных масс набирают пипеткой и производят посев так же, как мочи. Плотные части фекалий забирают петлей и опускают в 5 мл питательной среды, растерев их о край пробирки и тщательно перемешав с бульоном; затем переносят из этой пробирки 1 мл смеси во вторую пробирку, также содержащую 5 мл бульона. Как из первой, так и из второй пробирки производят посев по 0,1 мл на чашки Петри с плотной питательной средой.
Контролем служат аналогично поставленные опыты с добавлением к фекальной эмульсии стерильной воды вместо ДС.
Об эффективности исследуемого ДС судят на основании 6 - 8 опытов с совпадающими результатами. Эффективным считают ДС, обеспечивающее 100%-ную гибель тест-микроорганизмов в обеззараживаемом материале.
При определении эффективности ДС при обработке фекально-мочевой взвеси
с целью снижения микробной обсемененности консервации в качестве
тест-микроорганизма используют культуру E. coli (штамм 1257).
Фекально-мочевую взвесь готовят из расчета: 1 часть фекалий и 4 части мочи.
В пробирки разливают по 4,5 мл фекально-мочевой взвеси и добавляют в каждую
9
пробирку по 0,5 мл взвеси тест-культуры, содержащей 1 x 10 КОЕ/мл.
Неразведенное ДС или его растворы добавляют к фекально-мочевой взвеси в
различных соотношениях. По истечении времени воздействия из каждой пробы
отбирают по 0,5 мл жидкости и переносят в пробирки с 4,5 мл казеинового
бульона. Это обеспечивает нейтрализацию ДС. После ряда серийных разведений
из каждой пробирки производят высев на чашки Петри с питательным агаром
(мясо-пептонный, Эндо). Результаты эксперимента учитывают через 48 ч
инкубации при 37 °C. В контрольных пробах вместо препарата применяют
стерильную питьевую воду.
Эффективным считают ДС, обеспечивающее снижение микробной обсемененности фекально-мочевой взвеси не менее чем на 99,9% и не более чем через 120 мин.
Критерий эффективности обеззараживания выделений - 100%-ная гибель тест-микроорганизмов. Время обеззараживания выделений, контаминированных тест-микроорганизмами (S. aureus, E. coli, S. typhimurium), - не более 6 ч.
5.1.3.8. Исследование бактерицидной эффективности ДС,
предназначенных для обеззараживания воздуха
Целью исследования является определение эффективности химических ДС и разработка режимов их применения для обеззараживания воздуха в помещениях.
Химические ДС применяют для обеззараживания воздуха в помещениях в виде аэрозолей или паров растворов ДС, а также газов.
При исследовании эффективности обеззараживания воздуха химическими ДС в качестве тест-микроорганизмов используют S. aureus.
Исследования проводят в испытательных камерах объемом 1 - 2 куб. м. Предварительно внутреннюю поверхность камеры моют раствором моющего средства, остатки которого затем смывают водопроводной водой, и включают бактерицидный УФ-облучатель. В центре камеры располагают продезинфицированный вентилятор, производительностью 15 - 25 куб. м/ч, назначение которого - предотвращение быстрого оседания микроорганизмов.
Помещение, в котором находится испытательная камера, должно быть оборудовано УФ-облучателем рециркуляторного типа, который функционирует в течение всего эксперимента. Перед началом работы исследователь надевает халат, резиновые перчатки и маску.
При определении эффективности ДС, предназначенных для обеззараживания воздуха, используют 2 метода: седиментационный и аспирационный методы.
Седиментационный метод. Для проведения исследований седиментационным методом камера должна иметь окошко с дверцей размером 20 x 20 см для внесения в камеру чашек Петри.
Растопленный агар с добавленным нейтрализатором разливают по чашкам Петри, питательную среду не подсушивают.
До начала распыления суспензии тест-микроорганизма отбирают пробу на контроль обсемененности воздуха в камере, для чего открытую чашку Петри с питательной средой помещают на 30 мин. в камеру.
Затем в камере распыляют суспензию тест-микроорганизма в количестве,
достаточном для создания в воздухе камеры концентрации микроорганизмов
4
2,1 x 10 КОЕ/куб. м.
Аэрозоль создают с помощью распыливающей аппаратуры, которая обеспечивает образование в воздухе не менее 80% частиц с дисперсностью 10 +/- 5 мкм, и включают вентилятор. Для контроля степени контаминации воздуха открытую чашку Петри с питательной средой помещают в камеру на 10 мин.
Затем в камере распыляют раствор исследуемого средства и через определенные промежутки времени проверяют обсемененность воздуха.
Аспирационный метод. Этот метод основан на аспирировании воздуха через жидкость. При использовании аспирационного метода для оценки эффективности ДС, предназначенных для обеззараживания воздуха, необходимо следующее оборудование:
- воздуходувка с производительностью 15 - 25 л/мин.;
- стерильные склянки Дрекселя с 50 мл стерильной водопроводной воды из расчета 2 шт. на 1 пробу. Предварительно в стерильную воду вносят соответствующий нейтрализатор;
- трубка диаметром 8 - 10 мм, длиной 50 - 60 см, которая вводится в камеру для забора проб воздуха в центре камеры;
- стерильные резиновые шланги, соединяющие склянки Дрекселя (последовательно одну за другой) и далее с воздуходувкой.
Подготовка камеры к эксперименту осуществляется, как указано выше. Для исследования отбирается 50 л воздуха (объем пробы).
Очередность отбора проб следующая:
- контроль обсемененности воздуха до начала распыления суспензии тест-микроорганизмов;
- контроль обсемененности воздуха после распыления суспензии тест-микроорганизма;
- контроль эффективности обеззараживания - отбор проб через каждые 5 - 10 мин. в зависимости от предполагаемой эффективности ДС.
После отбора проб жидкость из 2 склянок Дрекселя смешивают и по 1 - 2 мл вносят в стерильную чашку Петри; затем заливают растопленным агаром. Посевы помещают в термостат. После инкубации подсчитывают количество выросших колоний и рассчитывают обсемененность 1 куб. м воздуха.
Пример:
10 x 0,015 x 1000
X = ----------------- = 10,
50
где:
X - КОЕ/куб. м;
10 - количество колоний, выросших на чашке Петри;
0,015 - объем стерильной питьевой воды, л;
1000 - 1 куб. м воздуха камеры, л;
50 - объем пробы воздуха, л.
Критерий эффективности обеззараживания воздуха в соответствии с категорией помещения, % (не менее): I - 99,9; II - 99,0; III - 95,0; IV - 90,0; V - 85,0.
5.1.3.9. Исследование эффективности ДС,
предназначенных для обеззараживания питьевой воды
и воды плавательных бассейнов
Методы распространяются на испытания химических ДС для обеззараживания индивидуальных и групповых запасов питьевой воды и воды плавательных бассейнов. Обеззараженная питьевая вода должна соответствовать требованиям СанПиН 2.1.4.1175-02 "Гигиенические требования к качеству воды нецентрализованного водоснабжения. Санитарная охрана источников" [20], ГОСТ 27283-87 [28], а вода плавательных бассейнов - требованиям СанПиН 2.1.2.1188-03 "Плавательные бассейны. Гигиенические требования к устройству, эксплуатации и качеству воды. Контроль качества" [22].
ДС для обеззараживания питьевой воды должны обеспечивать гибель в воде тест-микроорганизмов при их исходной концентрации:
5 6
- бактерий, не образующих споры, - 10 - 10 КОЕ/л;
5 6
- вирусов - 10 - 10 УЕ/л;
5 6
- бактерий в споровой форме не менее 10 - 10 спор/л (при
необходимости - в зависимости от назначения средства, п. 5.8).
ДС для обеззараживания воды плавательных бассейнов должны обеспечивать
гибель в воде тест-микроорганизмов при исходной концентрации:
при разработке режимов для постоянного обеззараживания воды в
присутствии посетителей:
2 3
- бактерий, не образующих споры, - 10 - 10 КОЕ/л;
2 3
- вирусов - 10 - 10 УЕ/л;
при разработке режимов для обеззараживания воды во время
продолжительного перерыва в работе бассейна более 2 ч:
5 6
- бактерий, не образующих споры, - 10 - 10 КОЕ/л;
5 6
- вирусов - 10 - 10 УЕ/л.
Тест-микроорганизмы. В качестве тест-микроорганизмов при изучении средств обеззараживания питьевой воды используют культуры E. coli (штамм 1257), S. typhimurium, РНК-содержащего колифага MS2.
В качестве тест-микроорганизмов при изучении средств обеззараживания воды плавательных бассейнов используют культуры E. coli (штамм 1257), S. aureus (штамм 906) и РНК-содержащего колифага MS2.
Питательные среды, методы культивирования и приготовления для экспериментов тест-культур бактерий, не образующих споры, приведены в п. п. 5.1, 5.3, 5.7.
Колифаг MS2 (штамм ВКПМ-3254) и штамм культуры клеток-хозяина E. coli K12
+ R
F Str получают во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ВКПМ
ГНИИ "Генетика", адрес: 113545, г. Москва, 1-й Дорожный проезд, д. 1.
Исследования проводят в соответствии с методическими указаниями
МУК 4.2.1018-01 "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды", Минздрав
России, М., 2001 [81].
+ R
Питательные среды и реактивы для колифага MS2 и E. coli K12 F Str :
Сухой питательный бульон
Агар питательный сухой ТУ 42-14-33-75
Стрептомицин стерильный
Хлороформ технический ГОСТ 20015-76
+ R
Приготовление питательных сред для колифага MS2 и E. coli K12 F Str .
Питательный бульон готовят из сухого препарата промышленного производства
по способу, указанному на этикетке; питательный бульон десятикратный для
колифагов - путем увеличения в 10 раз навески сухого препарата, указанной
на этикетке; питательный агар - из сухого препарата промышленного
производства по способу, указанному на этикетке; питательный агар двойной
концентрации для определения колифагов прямым методом - путем увеличения
навески сухого препарата в 2 раза от прописи.
Питательный агар запрещается выдерживать в расплавленном состоянии более 8 ч. Оставшийся неиспользованным агар повторному расплавлению не подлежит.
Полужидкий питательный агар готовят следующим образом: сухой питательный бульон (15 г) и агар микробиологический (3 г) растворить при нагревании в 1000 мл дистиллированной воды. Довести pH до 7,0 - 7,2, разлить в пробирки и стерилизовать автоклавированием при температуре 121 °C в течение 15 мин.
|
