Исследование синовиальной жидкости имеет большое значение при
Скачать 352.77 Kb.
|
Стандартизованная аналитическая технология клинического лабораторного анализа синовиальной жидкости.
Технология «Клинический лабораторный анализ синовиальной жидкости» выполняется с целью диагностики заболеваний суставов, а также для мониторинга течения заболевания и эффективности лечения [1]. Исследование синовиальной жидкости имеет большое значение при: - диагностике и дифференциальной диагностике заболеваний суставов, - установлении степени местной воспалительной активности и характера воспалительного процесса, - наблюдении за динамикой патологического процесса в суставах, - оценке эффективности вне- и, особенно, внутрисуставной терапии Клинический лабораторный анализ синовиальной жидкости осуществляется по общепринятой в мировой практике методике и обычно включает: - макроскопическую оценку с описанием цвета, прозрачности, наличия осадка; - измерение количества СЖ; - определение физико-химических свойств (вязкость, плотность муцинового сгустка), -микроскопическое исследование нативного препарата, идентификация кристаллов с помощью поляризационной микроскопии, определение цитоза и исследование препарата, окрашенного азур-эозином, с подсчетом процентного соотношения клеток (синовиоцитограммы). Кроме этого в синовиальной жидкости могут быть проведены и другие виды исследований: биохимические исследования (определение общего белка, глюкозы, мочевой кислоты и др.), микробиологические, иммунологические и цитологические (при подозрении на прорастание опухоли из мягких тканей и костей) исследования, которые выполняются в лабораториях или отделах клинико-диагностической лаборатории соответствующего профиля. 2. Требования к обеспечению выполнения технологии 2.1 Требования к специалистам и вспомогательному персоналу Перечень специалистов с высшим и средним образованием, участвующих в выполнении данной технологии: - врач клинической лабораторной диагностики или биолог; - специалист со средним медицинским образованием (медицинский технолог, медицинский лабораторный техник, фельдшер-лаборант, лаборант). Требования к образованию специалистов Врачи клинической лабораторной диагностики или биологи должны иметь последипломное образование и периодически проходить повышение квалификации в установленном порядке. Врачи должны иметь сертификат специалиста. Врачи или биологи выполняют микроскопическое исследование синовиальной жидкости. Специалисты со средним образованием (медицинский технолог, медицинский лабораторный техник, фельдшер-лаборант, лаборант) должны иметь соответствующую квалификацию по диплому, сертификат специалиста и проходить в установленном порядке повышение квалификации. Они проводят макроскопическую оценку, измерение количества, исследование физико-химических свойств, центрифугирование СЖ, подготовку нативного и окрашенного азур-эозином препаратов для микроскопического исследования СЖ. Знания и умения специалистов должны соответствовать требованиям образовательных стандартов. 2.2 Требования к обеспечению безопасности труда медицинского персонала Лица, отвечающие за получение, доставку и анализ образцов синовиальной жидкости, должны быть осведомлены о потенциальной биологической опасности. Все образцы биологического материала считаются потенциально инфицированными, так как часто невозможно знать заранее, инфицирован ли образец, Персонал должен соблюдать общие правила техники безопасности, принятые для работы в клинико-диагностических лабораториях [2,3]. Рекомендуется строго соблюдать общие предосторожности при ручной обработке образцов синовиальной жидкости и работе с другими материалами, используемыми при выполнении анализа. Это касается не только биологической опасности, но и работы с химическими реактивами и электроприборами. Для обеспечения безопасности работы в лаборатории необходимо следовать правилам стандарта ГОСТ Р ИСО 52095 —2007 [4]. Правила работы со специальным оборудованием и соблюдение пожарной безопасности. Все сотрудники должны выполнять инструкции и правила техники безопасности, изложенные в технических паспортах к электрическим приборам, используемым в технологии (фотометры, микроскопы, центрифуги); персонал, работающий с реактивами, должен быть обучен обращению с ними, использовать средства персональной защиты, соблюдать правила личной гигиены. Для предупреждения пожаров необходимо соблюдать правила пожарной безопасности в соответствии с действующими нормативными документами. Таким образом, необходимо строго придерживаться всех пунктов инструкций по технике безопасности, пожарной безопасности и биологической безопасности. 2.3 Условия выполнения технологии клинического лабораторного анализа синовиальной жидкости и функциональное назначение Клинический лабораторный анализ синовиальной жидкости выполняется в клинико-диагностических лабораториях специализированных амбулаторно-поликлинических и стационарных учреждений здравоохранения (ревматологических и артрологических центров). Функциональное назначение услуги: проводится с целью диагностики болезней суставов, наблюдения за течением и прогрессированием болезни и эффективностью лечения. 2.4.Материальные ресурсы, необходимые для выполнения технологии: приборы, средства измерения, лабораторное оборудование 2.4.1. Микроскоп бинокулярный с иммерсией и встроенным осветителем. 2.4.2.Микроскоп поляризационный. 2.4.3. Центрифуга лабораторная (с охлаждением: 5-8 оС). Для приготовления осадка синовиальной жидкости должны использоваться центрифуги, обеспечивающие 1000 об/мин. При использовании центрифуги необходимо строго следовать инструкции производителя. 2.4.4. Счетчик-калькулятор для подсчета лейкоцитарной формулы крови (для подсчета синовиоцитогрммы). 2.4.5. Штатив для пробирок. 2.4.6. Контейнеры и кюветы для окраски и фиксации мазков. 2.4.7. Приспособление для высушивания мазков. 2.4.8. Стеклянные (пластиковые) изделия. 2.4.8.1. Центрифужные пробирки (10 мл). Для макроскопического изучения СЖ лучше использовать прозрачные стеклянные пробирки. Для центрифугирования СЖ используются центрифужные пробирки из пластика, которые должны иметь коническую форму для концентрирования осадка, градуировку для определения количества полученной при пункции сустава синовиальной жидкости и закрываться крышками для уменьшения опасности разбрызгивания. Пробирки должны быть химически чистыми и маркированными для правильной идентификации пациента. Возможно применение вакуумных пробирок. 2.4.8.2. Камера Горяева. 2.4.8.3. Стекла предметные и стекла покровные для микроскопии нативного препарата. Стекло предметное (желательно с матовым полем для маркировки, размер 26 х 76 х 1.1 мм.) для микроскопии окрашенного препарата. Стекло предметное со шлифованным краем (размер 26 х 76 х1.1 мм.) или шпатель из пластика для приготовления мазка. 2.4.8.4. Пипетки для переноса синовиальной жидкости. В настоящее время используют пластиковые пастеровские пипетки с тонко оттянутым концом и баллончиком, предназначенные для стандартизации объема капли осадка и уменьшения риска биологической опасности, связанной с ресуспендированием или переносом синовиальной жидкости. Они должны быть сухими и химически чистыми. 2.4.8.5 Стеклянные палочки. 2.5 Реактивы 2.5.1 Растворы фиксаторов-красителей и другие необходимые реактивы для приготовления окрашенных мазков (см. ГОСТ Р Цитологическое исследование пунктата костного мозга); 2.5.2 раствор уксусной кислоты 5%; 2.5.3 ЭДТА (двукалиевая или двунатриевая соль). 2.5.4. раствор ализаринового красного 2%. 2.6 Прочий расходуемый материал 2.6.1. Перчатки резиновые. 2.6.2. Дезинфицирующие средства. 3. Характеристика методики выполнения технологии исследования синовиальной жидкости 3.1 Получение образцов синовиальной жидкости Для правильного проведения преаналитического этапа необходимо соблюдать требования стандарта ГОСТ Р 53079.4—2008. [5]. Пункцию сустава проводит врач-клиницист. Правила хранения и транспортировки образцов синовиальной жидкости изложены в приложении А. При пункции сустава СЖ собирают в стерильные центрифужные пробирки (2-3 или более, в зависимости от количества полученной СЖ) и немедленно передают в клинико-диагностическую лабораторию. Одну из пробирок (или более, в зависимости от числа полученных пробирок) направляют в микробиологическую лабораторию (отдел) для проведения микробиологических исследований, а остальные используют для проведения клинического лабораторного исследования СЖ (определения физико-химических свойств и микроскопического исследования нативных и окрашенных азур-эозином препаратов с подсчетом синовиоцитограммы, подсчета клеточных элементов в 1мкл (цитоз), а также выполнения биохимических и иммунологических исследований. Биохимические и иммунологические исследования проводят в супернатанте после центрифугирования СЖ, а осадок используют для поиска кристаллов в нативном препарате с применением поляризационного микроскопа, а также для подсчета синовиоцитограммы в окрашенном мазке. Для подсчета клеток можно собирать СЖ в пробирку, содержащую антикоагулянт (двунатриевую или двукалиевую соль ЭДТА), выпускаются специальные вакуумные пробирки с К2ЭДТА , которые могут быть использованы для взятия СЖ. При наличии соответствующих показаний (подозрение на наличие клеток новообразований) окрашенный мазок направляется в цитологическую лабораторию. 3.2 Идентификация образца В направлении на исследование должна быть включена следующая информация: фамилия и инициалы пациента, возраст или дата рождения, пол, отделение медицинского учреждения и палата (в стационаре), номер медицинской карты (идентификационный номер), диагноз, дата и время сбора образца синовиальной жидкости, время доставки образца в лабораторию. Должны быть перечислены все показатели, которые требуется определить. При необходимости указать лекарства, вводимые в пунктируемый сустав. Немаркированные или неправильно маркированные образцы не пригодны для исследования, о чем необходимо уведомить клинициста, назначившего анализ. 3.3 Приемлемость образца Так как точность результатов исследования синовиальной жидкости во многом зависит от качества доставленного образца, необходимо неукоснительно следовать правилам хранения и транспортировки синовиальной жидкости (приложение А). После доставки образца синовиальной жидкости в лабораторию сотрудник лаборатории, принимающий материал, должен проверить правильность оформления направления на анализ, маркировку посуды (код или фамилия больного и другие данные должны быть идентичны данным, указанным в бланке-направлении) и зарегистрировать поступивший материал. Рекомендуется сразу после получения доставлять образцы синовиальной жидкости в лабораторию, нативный образец необходимо исследовать как можно скорее - в течение 30 мин. Синовиальная жидкость, собранная в пробирку с К2 ЭДТА, должна исследоваться в течение также 30 мин., а при хранении в холодильнике (температура 3-50С) – не позднее, чем через 24 часа (только для проведения исследования окрашенных мазков). П р и м е ч а н и е ─ Длительное хранение супернатанта СЖ допускается при температуре -70О С для биохимических и иммунологических исследований. Отсрочка анализа и использование охлаждения образца отмечаются в бланке ответа. Перед исследованием образцы должны быть доведены до комнатной температуры. 3.4 Макроскопическая оценка и исследование физико-химических свойств синовиальной жидкости 3.4.1.Количество синовиальной жидкости в норме варьирует от 0,2 до 2,0 мл (в зависимости от величины сустава). При различных заболеваниях суставов количество СЖ может достигать 100 мл и более. 3.4.2. Цвет синовиальной жидкости. Цвет синовиальной жидкости в норме – светло-желтый . П р и м е ч а н и е ─Светло-желтая или желтая окраска синовиальной жидкости наблюдается при дегенеративных заболеваниях суставов; кровянистая – при травматических артритах; для воспалительных болезней суставов (ревматоидный артрит (РА), реактивный артрит (РеА), анкилозирующий спондилоартрит, псориатический артрит) характерны разные оттенки желтого и коричневого цвета (светло-желтого, желтого, лимонного, светло-коричневого, бурого, ягнтарного или оранжевого); при подагре наблюдается светло-желтая, зеленовато-желтая, молочно-белая, молочно-желтая, розовато-белая окраска СЖ; при пирофосфатных артритах и хондрокальцинозах – желтая или молочно-желтая, при септических артритах – серовато-желтая, зеленовато-желтая или кровянистая. 3.4.3. Прозрачность синовиальной жидкости. Нормальная синовиальная жидкость абсолютно прозрачна. Помутнение обычно обусловлено увеличением числа клеточных элементов, наличием кристаллов или микроорганизмов. Оценка прозрачности. Различают 4 степени прозрачности: прозрачная, полупрозрачная, умеренно-мутная и интенсивно-мутная. П р и м е ч а н и е – при дегенеративных заболеваниях суставов (остеоартроз) СЖ прозрачная и полупрозрачная; при воспалительных заболеваниях (РА, серонегативные артриты, подагра, пирофосфатные артриты) – полупрозрачная, умеренно-мутная или интенсивно-мутная; при септических артритах – интенсивно-мутная, густая. 3.4.4. Наличие осадка. В норме в СЖ осадка нет. Он появляется только при патологии и, как правило, представляет собой обрывки клеточных мембран, фибриновыъх нитей, фрагменты тканей, образующиеся в результате деструкции хряща и синовиальной оболочки, а также кристаллы. П р и м е ч а н и е ─ При дегенеративных заболеваниях суставов в СЖ обнаруживают аморфный осадок при амилоидозе. При воспалительных заболеваниях суставов осадок обнаруживают практически всегда. В СЖ больных РА, особенно часто у детей с ювенильным РА, можно наблюдать зернистый осадок, напоминающий рисовые зерна или «рисовые тельца», образованные из микроскопических фрагментов насыщенной фибрином некротической синовиальной оболочки. Подобный осадок может быть показателем высокой воспалительной активности процесса. 3.4.5. Вязкость Важнейшей особенностью СЖ, отличающей ее от других биологических жидкостей, является присутствие гиалуроновой кислоты – высокомолекулярного полимера. Именно гиалуроновая кислота, обладая высокой вязкостью, главным образом обеспечивает выполнение основных функций СЖ. Существует прямая зависимость между содержанием, молекулярной массой гиалуроновой кислоты и вязкостью СЖ. Методы определения вязкости. Количественные характеристики вязкости СЖ определяют с помощью вискозиметра. В рутинных исследованиях обычно используют метод со стеклянной палочкой: стеклянная палочка опускается в СЖ, а затем вынимается. Вязкость оценивается по длине муциновых нитей, различают три степени вязкости: при длине нити выше 5 см – вязкость высокая, до 5 см – средняя, менее 1 см – низкая. Возможно выражение вязкости в бальных единицах: 1 - высокая, 2 - средняя, 3 - низкая. В норме вязкость СЖ высокая. Интенсивность вязкости зависит от концентрации кристаллов, степени полимеризации гиалуроновой кислоты и температуры. П р и м е ч а н и е ─ Использование инструментальных методов с применением различных вискозиметров требует (кроме наличия прибора) целого ряда дополнительных операций и в связи с этим значительных затрат времени, не давая при этом какой-либо принципиально новой информации по сравнению с доступным лабораторным тестом. 4.4.6. Определениение плотности муцинового сгустка в синовиальной жидкости. Гиалуроновая кислота в СЖ существует в комплексе с белками, известном как муцин. Определение муцинового сгустка имеет большое диагностическое значение при воспалительных заболеваниях. Тест на муцин в синовиальной жидкости хорошо коррелирует с вязкостью. Методы исследования плотности муцинового сгустка. Принцип метода: при воздействии на СЖ уксусной кислоты образуется муциновый сгусток. Ход определения: В пробирку, содержащую 3 мл 5% раствора уксусной кислоты (СН3СООН), добавляют каплю СЖ. Интенсивно встряхивают содержимое пробирки в течение 1 мин., образуется осадок. Различают 4 степени плотности осадка: плотный (осадок выглядит плотным комком), умеренно плотный (вид разветвленной, но не распавшейся структуры), умеренно рыхлый и рыхлый – в большей или меньшей степени распадается на мельчайшие частицы. Образование плотного муцинового сгустка свидетельствует о значительном содержании муцина. В норме осадок плотный. П р и м е ч а н и е 1 ─ При невоспалительных артропатиях муциновый сгусток как правило – плотный или умеренно плотный.. При воспалительных заболеваниях суставов - умеренно рыхлый и рыхлый. П р и м е ч а н и е 2 ─ Определение вязкости и плотности муцинового сгустка имеет важное значение для дифференциации «невоспалительного» и воспалительного характера процесса в суставе. Эти методы могут быть взаимоконтролирующими: показатели одного метода строго соответствуют показателям другого. Высокая вязкость соответствует плотному, средняя – умеренно плотному, низкая – умеренно рыхлому и рыхлому муциновому сгустку. |
Похожие:
 | Стандартизованная технология клинического лабораторного анализа мочи. Анализ мочи общий |  | Этим и определяется значение физики в школьном образовании. Физика имеет большое значение в жизни современного общества и влияет... |
| География как учебный предмет в специальной (коррекционной) школе имеет большое значение для всестороннего развития обучающихся со... | | Бухгалтерский учет имеет большое значение в деятельности предприятия. Он характеризует все стороны его функционирования, а также... |
| «Разработка и исследование методов и средств разделения компонентов двухфазного трехкомпонентного течения с целью обеспечения диапазонов... | | В данной работе рассматривается сметная стоимость строительства и состав общих затрат инвестиционного проекта. Данная тема достаточно... |
| Если наследников несколько, то далеко не всегда они могут между собой договориться о том, как наследство делить. Поэтому правовая... | | ... |
| Хирургический метод лечения имеет большое значение в клинической медицине. Одну четверть заболеваний составляют хирургические болезни.... | | Налоги имеют большое значение для финансирования дорожного хозяйства России. До недавнего времени дорожные фонды формировались главным... |