МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО КОНТРОЛЮ КАЧЕСТВА ВЕТЕРИНАРНОЙ ДЕЗИНФЕКЦИИ
ОБЪЕКТОВ ЖИВОТНОВОДСТВА
1. Общая часть
1.1. Настоящие методические указания определяют порядок и методы контроля качества профилактической и вынужденной (текущей и заключительной) дезинфекции объектов, подлежащих ветеринарному надзору.
1.2. Методические указания предназначены для специалистов ветеринарных лабораторий, а также лабораторий хозяйств, дезинфекционно-промывочной станции (ДПС) и предприятий по производству и переработке мяса и сырья животного происхождения.
1.3. Контроль качества проводят в три этапа:
1.3.1. Контроль подготовки объектов к дезинфекции (проверяют степень очистки поверхностей, их увлажненность, защиту электрооборудования и приборов, герметизацию помещений) осуществляет ветеринарный специалист, ответственный за ее проведение.
1.3.2. Контроль за соблюдением установленных режимов дезинфекции (выбор препарата и метода дезинфекции, концентрация, температура раствора, равномерность увлажнения поверхностей дезинфицирующим раствором, соблюдение параметров производительности используемых машин и аппаратов, качество распыления раствора) проводит ветеринарный специалист, ответственный за это мероприятие.
1.3.3. Бактериологический контроль качества дезинфекции осуществляют специалисты ветеринарных лабораторий периодически или в сроки, установленные с учетом эпизоотической обстановки, технологии производства, целей дезинфекции и других конкретных особенностей.
1.3.3.1. Бактериологический контроль качества дезинфекции должен быть неожиданным, без предварительного уведомления работников, ответственных за проведение дезинфекции, и исполнителей этих работ о времени и месте отбора проб для исследования.
1.3.3.2. При бактериологическом контроле качества дезинфекции определяют наличие на поверхностях обеззараживаемых объектов жизнеспособных клеток санитарно-показательных микроорганизмов - бактерий группы кишечной палочки (Escherichia, Citrobacter, Enterobacter), стафилококков (aureus, epidermatis, saprophiticus), микобактерий или спорообразующих аэробов рода Bacillus.
Качество обеззараживания спецодежды контролируют по выделению тест-микроорганизмов на искусственно контаминированных кусочках ткани, закладываемых в подлежащий обеззараживанию материал.
1.3.3.3. По наличию или отсутствию бактерий группы кишечной палочки определяют качество профилактической и вынужденной (текущей и заключительной) дезинфекции при бруцеллезе, колибактериозе, лептоспирозе, листериозе, болезни Ауески, лейкозе, пастереллезе, сальмонеллезах, трихомонозе, кампилобактериозе, трипанозомозе, токсоплазмозе, инфекционном ринотрахеите, парагриппе и вирусной диарее крупного рогатого скота, контагиозной эктиме, инфекционной агалактии и контагиозной плевропневмонии овец и коз, отечной болезни, инфекционном атрофическом рините, дизентерии, трансмиссивном гастроэнтерите, балантидиозе, гемофилезной плевропневмонии и роже свиней, ринопневмонии лошадей, пуллорозе-тифе птиц, миксоматозе кроликов, микоплазмозе птицы, а также текущей дезинфекции при болезнях, указанных в п. 1.3.3.4 (кроме туберкулеза, споровых и экзотических инфекций).
1.3.3.4. По наличию или отсутствию стафилококков контролируют качество текущей дезинфекции при туберкулезе, болезнях, вызываемых спорообразующими микроорганизмами, и экзотических инфекциях; заключительной дезинфекции при туберкулезе, аденовирусных инфекциях, ящуре, оспе, туляремии, орнитозе (пситтакозе), диплококкозе, стафилококкозе, стрептококкозе, некробактериозе, катаральной лихорадке, бешенстве, чуме всех видов животных, злокачественной катаральной горячке, ринопневмонии и паратуберкулезном энтерите крупного рогатого скота, инфекционной катаральной лихорадке, копытной гнили и инфекционном мастите овец, везикулярной болезни свиней, инфекционной анемии, инфекционном энцефаломиелите, эпизоотическом лимфангоите, сапе и мыте лошадей, гепатите утят, вирусном энтерите гусят, инфекционном бронхите, ларинготрахеите, болезни Марека, болезни Гамборо, инфекционном энцефаломиелите, ньюкаслской болезни, вирусном энтерите, алеутской болезни, псевдомонозе и инфекционном гепатите плотоядных, хламидиозах, риккетсиозах, энтеровирусных инфекциях, гриппе сельскохозяйственных животных и птицы, трихофитии, микроспории, других микозах животных и птицы, актиномикозе крупного рогатого скота, а также болезнях, вызываемых неклассифицированными вирусами, и дезинфекции вагонов второй категории.
Качество заключительной дезинфекции при микозах контролируют также по выделению соответствующих возбудителей.
1.3.3.5. Качество заключительной дезинфекции при туберкулезе контролируют по выделению стафилококков и микобактерий, при сибирской язве, эмфизематозном карбункуле, брадзоте, злокачественном отеке, других споровых инфекциях и экзотических инфекциях, а также вагонов третьей категории - по наличию или отсутствию спорообразующих микроорганизмов рода Bacillus.
2. Отбор проб для исследования
2.1. Отбирают пробы для бактериологического контроля и доставляют их в лабораторию специалисты, не несущие ответственности за качество дезинфекции и не находящиеся в подчинении работников, ответственных за ее проведение.
2.2. Отбор проб проводят по истечении срока экспозиции, указанного в соответствующих разделах настоящей инструкции, до начала проветривания помещений; при дезинфекции спецодежды - по окончании цикла обработки (обеззараживания, стирки, ополаскивания и отжима).
2.3. Пробы (смывы, отпечатки, соскобы) для исследования берут с 10 - 20 различных участков поверхности животноводческого помещения (полов, стойл, проходов, стен, перегородок, столбов, кормушек, поилок и т.д.). При наличии на объекте участков поверхности с механическими загрязнениями пробы материала для исследования берут методом соскобов.
При контроле качества дезинфекции других объектов ветеринарного надзора пробы берут с 10 - 20 различных наименее доступных для дезинфекции участков поверхностей каждого помещения.
2.3.1. Для контроля качества дезинфекции при туберкулезе с каждого вида поверхности берут по пять смывов, которые объединяют в одну пробу. Из каждого помещения отбирают не менее 10 объединенных проб, в том числе по три пробы с пола и кормушек.
При заключительной дезинфекции одновременно берут пробы с территории фермы в разных направлениях от углов здания и от центра каждой стены на расстоянии 5, 10 и 15 м (с учетом рельефа местности). Всего с прилегающей территории отбирают не менее 24 проб. Поверхностный слой грунта разрыхляют стерильным скальпелем или ножом на глубину 3 - 5 см и отбирают в стерильную посуду 10 - 20 г исследуемого материала. Если прилегающая территория имеет твердое покрытие, пробы отбирают методом смывов.
2.4. После проведения дезинфекции и последующей экспозиции с участков, подвергаемых контролю, отбирают пробы стерильными ватно-марлевыми тампонами, смоченными в стерильном нейтрализующем растворе или воде.
Участки площадью 10 х 10 см тщательно протирают до полного снятия с поверхности всех имеющихся на ней загрязнений, после чего тампоны помещают в пробирку с нейтрализующей жидкостью.
Плотные загрязнения (корочки) снимают с помощью стерильного скальпеля и переносят в эту же пробирку.
Для нейтрализации хлорсодержащих дезинфицирующих средств служит раствор тиосульфата натрия (гипосульфита), щелочных растворов - раствор уксусной кислоты; формалина - раствор аммиака (нашатырный спирт); кислот, перекиси водорода и ее производных - раствор бикарбоната натрия.
При использовании для дезинфекции щелочного раствора формальдегида участки сначала увлажняют раствором аммиака, затем дополнительно раствором уксусной кислоты.
При дезинфекции препаратами, для которых нет нейтрализаторов, применяют стерильную водопроводную воду.
2.5. Отпечатки на тонкий слой плотной питательной среды берут лица, прошедшие специальную подготовку.
Предметные стекла с нанесенной средой (п. 9 Приложения 3) извлекают корнцангом из ванн или пробирок, не касаясь застывшей питательной среды, и накладывают на исследуемый объект таким образом, чтобы питательная среда соприкасалась с его поверхностью. Через 2 мин. пробы-отпечатки отделяют от контролируемого объекта и помещают в ванны или пробирки, в которых их транспортировали. При взятии проб с труднодоступных или вертикальных поверхностей время контакта слоя питательной среды с объектом сокращают до 30 с.
2.6. Смывы должны быть доставлены в лабораторию в течение 3 - 6 ч с момента взятия, отпечатки - не позднее 2 ч.
3. Контроль качества дезинфекции помещений
3.1. Метод бактериологического исследования смывов.
3.1.1. Пробы, каждую в отдельности, отмывают в той же пробирке путем нескольких погружений и отжатий тампона. Последний удаляют, а жидкость центрифугируют 20 - 30 мин. при 3000 - 3500 об./мин. Затем надосадочную жидкость сливают, в пробирку наливают такое же количество стерильной воды, содержимое смешивают и снова центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают, а из центрифугата делают посевы.
При наличии в смыве грубых механических примесей их растирают в пробирке стеклянной палочкой, после чего смыв переносят в центрифужную пробирку.
3.1.2. Для индикации кишечной палочки 0,5 мл центрифугата высевают в пробирки с модифицированной средой Хейфеца или КОДА (п. 11.1). Посевы выдерживают 12 - 18 ч в термостате при температуре 37 - 38 °С. Изменение сиренево-красного цвета сред (в зеленый или салатовый) с помутнением их и образованием газа свидетельствует о наличии роста кишечной палочки.
Другие изменения цвета (желтоватый, розовый, сероватый), наблюдаемые при росте микроорганизмов других видов, не учитывают.
В сомнительных случаях делают подтверждающий посев с жидких сред на агар Эндо. Посевы инкубируют 12 - 16 ч при температуре 37 - 38 °С.
3.1.3. Для индикации стафилококков 0,5 мл центрифугата высевают в 5 мл мясопептонного бульона с 6,5% хлористого натрия. Через 24 - 48 ч инкубирования посевов при температуре 37 - 38 °С делают пересевы бактериологической петлей на 8,5%-ный солевой мясопептонный агар. Посевы выдерживают в термостате 24 - 48 ч при температуре 37 - 38 °С. Из выросших культур для подтверждения роста стафилококков готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют.
3.1.4. Для индикации спорообразующих аэробов смывы обрабатывают, как указано в п. 3.1.1 Приложения 3, но перед центрифугированием их прогревают 30 мин. на водяной бане при 65 °С, затем центрифугируют. Из центрифугата каждой пробы делают посевы в одну пробирку с мясопептонным бульоном (МПБ) и на две чашки с мясопептонным агаром (МПА). Для контроля качества дезинфекции при сибирской язве МПА может быть заменен дифференциально-диагностической средой (п. 11.3 Приложения 3). Посевы инкубируют 24 - 48 ч в термостате при 37 °С.
При наличии роста на МПА подсчитывают колонии и изучают морфологию их при малом увеличении микроскопа. В случае возникновения подозрения на выделение возбудителя сибирской язвы идентификацию такой культуры проводят в порядке, предусмотренном действующими методическими указаниями.
При наличии роста на дифференциально-диагностической среде в крышку чашки Петри вносят 1 - 2 мл культуры при 20 +/- 20 °С в течение 1 мин., после чего визуально или под малым увеличением микроскопа проводят учет теста.
Под действием паров аммиака происходит порозовение колоний микроорганизмов, обладающих фосфатазной активностью.
Bac. anthracis фосфатазной активностью не обладают и его колонии остаются бесцветными.
При отсутствии роста или характерных колоний на плотных средах и наличии роста в МПБ делают дробные посевы из МПБ на плотную питательную среду.
3.1.5. При просмотре посевов учитывают общее число проб, в которых обнаружен рост санитарно-показательных микроорганизмов, а при споровой инфекции - и колонии непатогенных спорообразующих аэробов рода Bacillus.
3.2. Метод отпечатков на тонкий слой плотной питательной среды.
3.2.1. Метод отпечатков наиболее приемлем в условиях промышленного ведения животноводства на комплексах, птицефабриках и других объектах, где имеются лаборатории.
3.2.2. Ванны и пробирки с пробами-отпечатками, доставленные в лабораторию, помещают на 16 - 18 ч в термостат при температуре 37 °С.
3.2.3. После инкубирования пробы просматривают невооруженным глазом на наличие роста.
При отсутствии макроколоний и изменения среды пробы дальнейшим исследованиям не подвергают. В сомнительных случаях, когда отсутствует рост макроколоний, но изменены цвет или прозрачность среды, пробы-отпечатки высушивают на воздухе до полного подсыхания среды, фиксируют над пламенем, окрашивают по Муромцеву и микроскопируют с целью обнаружения микроколоний.
3.2.4. Учитывают общее число отпечатков, в которых обнаружен рост микроорганизмов.
3.3. Исследование с целью выделения микобактерий.
3.3.1. Контроль качества заключительной дезинфекции при туберкулезе проводят параллельно двумя методами по выделению стафилококка и микобактерий.
3.3.2. Смывы обрабатывают, как указано в п. 3.1.1. Из центрифугата каждой объединенной пробы делают высев на среды для выделения стафилококков (п. 3.1.3), готовят по шесть мазков на узких (1,2 х 7,5 см) предметных стеклах (п. 10 Приложения 3). Мазки высушивают при комнатной температуре или в термостате 2 - 3 ч, складывают их по два тыльной стороной и погружают в 8 - 12%-ный раствор серной кислоты на 15 мин. После этого стекла-мазки берут пинцетом и погружают на 5 - 10 с в стерильную дистиллированную воду, а затем переносят в пробирки со средой Сотона и помещают на 12 суток в термостат при 37 - 38 °С.
3.3.3. Пробы почвы с прилегающей территории и соскобов с поверхности помещений (каждую в отдельности) помещают в колбу, заливают дву-трехкратным количеством дистиллированной воды, взбалтывают и фильтруют через двойной слой марли в узкогорлую колбу вместимостью 200 - 250 мл. К фильтрату добавляют 2 - 3 мл ксилола или авиационного бензина, встряхивают 15 - 20 мин. и доливают дистиллированную воду до горлышка. Содержимое отстаивают 30 мин. с целью получения флотата, из которого готовят мазки на узких предметных стеклах (п. 3.3.2).
3.3.4. При наличии роста стафилококков хотя бы в одной исследованной пробе качество дезинфекции признают неудовлетворительным и дальнейшее исследование по выделению микобактерий не проводят.
3.3.5. Стекла с мазками извлекают из пробирок на 6-й, 8-й и 12-й день инкубирования, высушивают, фиксируют над пламенем горелки, окрашивают по Циль-Нильсену и микроскопируют для обнаружения микроколоний.
3.4. Оценка результатов исследования.
3.4.1. Качество профилактической дезинфекции помещений для получения и содержания молодняка скота (птицы) и текущей дезинфекции изолированных секций (боксов, скотных дворов) с автономной системой жизнеобеспечения животных признают удовлетворительным при отсутствии роста санитарно-показательных микроорганизмов в 90% исследованных проб.
При профилактической дезинфекции помещений для содержания взрослого поголовья и текущей дезинфекции частично освобожденных от животных или неизолированных помещений допускается выделение санитарно-показательных микроорганизмов из 20% исследованных проб.
3.4.2. Качество заключительной дезинфекции при ее контроле по выделению бактерий группы кишечной палочки, стафилококков, грибов и микобактерий признают удовлетворительным при отсутствии выделения названных культур во всех исследованных пробах.
При споровых инфекциях качество дезинфекции признают удовлетворительным при отсутствии роста Bac. anthracis. При прямом посеве на МПА допускают рост единичных (не более трех в смыве) колоний непатогенных спорообразующих аэробов рода Bacillus.
4. Контроль качества профилактической аэрозольной дезинфекции, проводимой формалином
4.1. Метод предназначен для быстрого (непосредственно после окончания экспозиции дезинфекции) контроля качества аэрозольной дезинфекции животноводческих помещений, проводимой формалином.
|
