контаминированных тест-микроорганизмами
Многообразие факторов передачи туберкулеза и длительная выживаемость возбудителей туберкулеза и микобактериозов во внешней среде обосновывает необходимость обеззараживания большого перечня объектов, которые могут быть контаминированы возбудителями в инфекционном очаге на дому, в лечебно-профилактических учреждениях, в специализированных бактериологических лабораториях, работающих с этими возбудителями.
Учитывая вышесказанное, перечень тест-объектов, моделирующих объекты, подлежащие дезинфекции, включает: поверхности помещений, мебели, аппаратов, приборов, санитарно-технического оборудования, транспортных средств и др.; изделия медицинского назначения, в т.ч. эндоскопы; предметы ухода за больными, игрушки; посуду, включая лабораторную и из-под выделений; белье, одежду, спецодежду и другие объекты из тканей; изделия из резины, в т.ч. перчатки, сапоги, фартуки и др.; обувь; руки в резиновых перчатках; остатки пищи; выделения: фекалии, мочу, кровь, мокроту; воду; воздух; медицинские отходы.
5.2.3.1. Исследование туберкулоцидной эффективности ДС,
предназначенных для обеззараживания поверхностей помещений,
мебели, аппаратов, приборов, санитарно-технического
оборудования, транспортных средств и других объектов
В исследованиях используют тест-поверхности (10 x 10 см) из различных материалов: дерева (неокрашенного, окрашенного масляной, клеевой или другими красками, оклеенного обоями), линолеума, пластика, кафеля, фаянса, плитки, металлов, стекла.
Тест-поверхности из различных материалов (за исключением деревянных
тест-поверхностей, окрашенных клеевой краской и оклеенных обоями) тщательно
моют водой с мылом и щеткой, стерилизуют в паровом стерилизаторе (при
температуре (121 +/- 1) °C в течение 30 мин.). Тест-поверхности, окрашенные
клеевой краской и оклеенные обоями, протирают несколько раз стерильной
марлевой салфеткой, увлажненной стерильной питьевой водой. Готовят
9
суспензию тест-микобактерий, содержащую 2,0 x 10 КОЕ/мл. При разработке
режимов обеззараживания раковин, ванн и других загрязненных объектов для
имитации органического загрязнения к суспензии добавляют 40,0% лошадиной
сыворотки, инактивированной при 56 °C в течение 30 мин. (к 6 мл
2-миллиардной суспензии прибавляют 4 мл сыворотки).
После подсыхания тест-поверхности располагают горизонтально и на них с помощью одноканального механического дозатора или стеклянной пипетки наносят 0,5 мл суспензии тест-микроорганизма. Суспензию равномерно распределяют по тест-поверхности (100 кв. см) стерильным стеклянным шпателем. Если суспензия тест-микроорганизма не распределяется равномерно, а собирается в каплю, растирание шпателем по тест-поверхности осуществляют неоднократно (3 - 5 раз). Контаминированные тест-поверхности подсушивают при комнатной температуре до полного высыхания (30 - 120 мин.). Обеззараживание тест-поверхностей осуществляют способами протирания, орошения дезинфицирующим раствором.
При обеззараживании тест-поверхности из дерева (окрашенные клеевой и другими красками, оклеенные обоями), из стекла, кафеля и т.п. располагают вертикально; поверхности из линолеума, метлахской плитки и других покрытий для пола располагают горизонтально. Тест-поверхности обеззараживают путем их орошения, протирания (однократного или двукратного) дезинфицирующим раствором.
В зависимости от вида обрабатываемой поверхности и наличия загрязнений на ней норма расхода ДС на одну обработку способом протирания составляет 100 - 150 мл на кв. м (1,0 - 1,5 мл на 100 кв. см); способом орошения - 150 мл на кв. м (1,5 мл на 100 кв. см) при обработке распылителем типа "Квазар" и 300 мл на кв. м (3 мл на 100 кв. см) - при обработке распылителем типа "Автомакс" или гидропультом.
При необходимости обработку способом протирания или орошения повторяют через 5 - 15 мин.
Для контроля эффективности обеззараживания через определенные промежутки времени (15 - 30 - 60 и т.д. до 120 мин.) с тест-поверхностей делают смывы путем тщательного протирания поверхности стерильной марлевой салфеткой (5 кв. см), увлажненной нейтрализатором. После протирания на тест-поверхности не должно оставаться излишней влаги. Салфетки погружают на 5 мин. в пробирки (емкости) с соответствующим нейтрализатором (10 мл), а затем в стерильную питьевую воду с бусами и встряхивают на шейкере в течение 10 мин. Полученную смывную жидкость вносят по 0,1 мл в 3 - 5 пробирок со скошенной плотной питательной средой Левенштейна-Йенсена или "Новая", тщательно распределяя ее по всей поверхности. Посевы инкубируют в термостате при температуре (37 +/- 1) °C в течение 10 - 21 суток.
В контрольных опытах для обработки аналогично контаминированных тест-поверхностей вместо раствора ДС используют стерильную питьевую воду объемом из того же расчета, что и опытный. Жидкость, в которую помещают стерильную марлевую салфетку после взятия смыва с контрольных поверхностей, перед посевом разводят в 100 раз и вносят по 0,1 мл на скошенную поверхность плотной питательной среды Левенштейна-Йенсена или "Новая" в 3 - 5 пробирок. Посевы инкубируют в термостате при температуре (37 +/- 1) °C. Учитывают результаты через 10 - 21 суток.
Оценку результатов проводят по посеву того разведения, в котором число колоний на чашке Петри или в пробирке составляет от 30 до 300.
После выдерживания посевов в термостате подсчитывают число колоний на чашках или пробирках с плотной питательной средой, рассчитывают остаточную плотность контаминации на 100 кв. см тест-поверхности и высчитывают эффективность обеззараживания, принимая количество тест-микроорганизмов, снятых с контрольных тест-объектов тест-поверхностей, за 100%.
Например: на 100 кв. см контрольной тест-поверхности по результатам бактериологического контроля обнаружено 148000 микробных клеток, а на аналогичного вида опытной тест-поверхности - 20 микробных клеток.
148000 - 100%
x = 20 x 100 : 148000 = 2 : 148 = 0,013%.
20 - x
Эффективность обеззараживания опытной тест-поверхности составляет:
100 - 0,013 = 99,987%.
Критерий эффективности ДС при обеззараживании тест-поверхностей из различных материалов, контаминированных тест-микроорганизмом, равен не менее 99,99%.
5.2.3.2. Исследование туберкулоцидной эффективности ДС,
предназначенных для обеззараживания предметов ухода
за больными и игрушек из различных материалов кроме мягких
В исследованиях используют тест-объекты (100 кв. см) и предметы ухода за больными из различных материалов: резин на основе натурального и силиконового каучука (медицинская клеенка, грелка, груша); стекла (поильник; плевательница; градусник); пластмасс (грелка, лоток; наконечник для клизм); металлов (таз, стакан для термометра); игрушки (кроме мягких) из резин и пластмасс.
Тест-объекты, предметы ухода за больными и игрушки из различных материалов тщательно моют водой с мылом и щеткой. Тест-объекты стерилизуют паровым или воздушным методом.
9 -1
Готовят суспензию тест-микобактерий, содержащую 2,0 x 10 КОЕ мл . К
суспензии добавляют 40,0% лошадиной сыворотки, инактивированной при 56 °C в
течение 30 мин. (к 6 мл 2-миллиардной суспензии прибавляют 4 мл сыворотки).
С помощью одноканального механического дозатора или стеклянной пипетки на поверхность тест-объекта наносят 0,5 мл суспензии тест-микроорганизма. Суспензию равномерно распределяют по поверхности (100 кв. см) стерильным стеклянным шпателем. Каналы и полости предмета ухода за больными, игрушек заполняют с помощью шприца. Мелкие игрушки полностью погружают в суспензию. Контаминированные тест-объекты, предметы ухода за больными и игрушки подсушивают при комнатной температуре до полного высыхания 30 - 120 мин.
Растворы ДС готовят на водопроводной воде при температуре (20 +/- 2) °C. Обеззараживание осуществляют способом погружения, протирания, орошения. После подсушивания контаминированные тест-объекты, предметы ухода за больными, игрушки, в т.ч. имеющие каналы и полости, погружают в раствор испытуемого дезинфицирующего средства или протирают салфеткой, смоченной им. Мелкие игрушки полностью погружают в емкость с раствором ДС, препятствуя их всплытию; крупные игрушки обеззараживают способом орошения. Норма расхода ДС способом протирания из расчета 100 - 150 мл/кв. м при однократной обработке и 200 - 300 мл/кв. м при двукратной; способом орошения - 150 мл/кв. м при обработке распылителем типа "Квазар" и 300 мл/кв. м - при обработке распылителем типа "Автомакс" или гидропультом. При необходимости обработку способом протирания или орошения повторяют через 5 - 15 мин.
Для контроля эффективности обеззараживания через определенные промежутки времени после обработки (30 - 60 - 120 мин.) тест-объекты, предметы ухода за больными и игрушки извлекают из раствора, делают смывы стерильной марлевой салфеткой (5 кв. см), увлажненной нейтрализатором. Салфетки погружают в стерильный раствор нейтрализатора на 5 мин., затем переносят в пробирки (емкости) с бусами и стерильной питьевой водой (10 мл) и встряхивают на шейкере в течение 10 мин. Каналы и полости промывают нейтрализатором (10 мл), который собирают в стерильные пробирки (емкости) и оставляют на 5 мин. для нейтрализации.
Полученную смывную жидкость и смывную жидкость из каналов вносят по 0,1 мл на скошенную поверхность плотной питательной среды Левенштейна-Йенсена или "Новая" в 3 - 5 пробирок. В контрольных опытах вместо раствора ДС используют стерильную питьевую воду.
Посевы инкубируют в термостате при температуре (37 +/- 1) °C.
Результаты учитывают через 10 - 21 сутки инкубирования.
Эффективность ДС при обеззараживании тест-объектов, предметов ухода за больными и игрушек из различных материалов (кроме мягких), контаминированных тест-микроорганизмом, должна быть не менее 100%.
5.2.3.3. Исследование туберкулоцидной эффективности ДС,
предназначенных для обеззараживания посуды столовой,
лабораторной и из-под выделений
Для определения туберкулоцидной активности ДС, предназначенных для обеззараживания посуды, используют в качестве тест-объектов набор столовой и чайной посуды: тарелки, стаканы, кружки из различного материала (фарфор, фаянс, алюминий, стекло, пластик, посуда, покрытая эмалью); столовые приборы: ножи, вилки, ложки из различного материала (нержавеющая сталь, алюминий, пластик); посуду одноразового использования и набор лабораторной посуды, представляющий тест-объекты из стекла и пластмасс: предметные и покровные стекла, пипетки, чашки Петри, планшеты для иммунологического анализа и др.; посуду из-под выделений (мочеприемники, подкладные судна). Перед экспериментом посуду и столовые приборы моют водой с мылом и щеткой и высушивают.
На посуду (площадь в 100 кв. см) пипеткой наносят суспензию
9
тест-микроорганизма из расчета 0,5 мл суспензии, содержащей 2 x 10 КОЕ в
1 мл. Суспензию тест-микроорганизма равномерно распределяют по поверхности
посуды стеклянным шпателем. Столовые приборы для контаминации погружают в
бактериальную суспензию на 1 - 2 мин., оставляя незараженными их ручки.
Контаминированную посуду подсушивают (до полного высыхания) при комнатной
температуре (30 - 120 мин.) и относительной влажности воздуха 50 - 60%.
Для разработки режимов обеззараживания посуды с остатками пищи при контаминации используют суспензию тест-микроорганизма, смешанную с овсяной, манной или другой кашей, сваренной на молоке со сливочным маслом (к 10 г каши добавляют 1 мл 2-миллиардной микробной взвеси). Для имитации загрязнения чайной посуды используют кисель (к 10 г киселя добавляют 1 мл 2-миллиардной микробной взвеси), лабораторной посуды - 40,0% инактивированной сыворотки, посуды из-под выделений - 20,0%-ную эмульсию фекалий, предварительно растертую в ступке.
Обработку столовой, чайной, лабораторной посуды, столовых приборов проводят способом погружения в дезинфицирующий раствор. Растворы готовят на питьевой воде. Температура испытуемого раствора 18 - 20 °C. При необходимости изучают эффективность растворов ДС при температуре 50 °C.
Дезинфицирующий раствор должен полностью заполнить и с избытком покрыть всю посуду и приборы (из расчета не менее 2 л на 1 комплект).
Время обеззараживания посуды - от 15 до 240 мин., в зависимости от вида ДС и наличия загрязнения.
Через определенные интервалы времени (например, 15, 30, 60 мин. и т.д.) извлекают по одному предмету разных наименований (например, тарелка, стакан, предметное стекло, нож и т.д.) из дезинфицирующего раствора и стерильной марлевой салфеткой (5 кв. см), смоченной в растворе нейтрализатора, соответствующего данному ДС, тщательно протирают зараженную часть каждого предмета и погружают в 10 мл этого же нейтрализатора на 5 мин., затем салфетку переносят в пробирку со стерильной питьевой водой и бусами. Время отмыва марлевой салфетки - 10 мин. при постоянном встряхивании на шейкере. После отмыва смывную жидкость по 0,1 мл высевают в 3 - 5 пробирок со скошенной поверхностью плотной питательной среды Левенштейна-Йенсена или "Новая" (по 0,1 мл в каждую). Посевы помещают в термостат при температуре 37 °C. Предварительный учет результатов проводят через 10 - 14 суток, окончательный - через 21 сутки.
Контролем служит аналогично контаминированная посуда, которая погружается не в дезинфицирующий раствор, а в такой же объем стерильной питьевой воды.
Критерий эффективности обеззараживания посуды: гибель тест-микроорганизма не менее 100%.
5.2.3.4. Исследование туберкулоцидной эффективности ДС,
предназначенных для обеззараживания изделий медицинского
назначения ИМН, включая эндоскопы
5.2.3.4.1. Исследование туберкулоцидной эффективности ДС, предназначенных для обеззараживания ИМН (кроме эндоскопов)
В качестве тест-изделий используют стерильные инструменты и другие ИМН, в т.ч. однократного применения, из различных материалов (металлов, резин, стекла, пластмасс) или имитирующие их тест-объекты. Перечень инструментов должен включать разнообразные по форме, характеру поверхности и используемому материалу изделия (гладкие изделия простой конфигурации; изделия, имеющие замковые части, каналы и полости, насечки и напыления, изделия извитой формы; изделия, изготовленные из нескольких видов материалов, и т.д.).
На рабочую поверхность тест-изделия (у замковых изделий - также в
область замка, а при наличии каналов и полостей - также в канал изделия)
9
наносят 0,1 мл суспензии, содержащей 2 x 10 КОЕ/мл тест-микроорганизма и
40% инактивированной лошадиной сыворотки. Мелкие тест-изделия для
контаминации погружают в эту суспензию на 15 мин. Контаминированные
тест-изделия подсушивают в термостате в течение 20 - 25 мин.
Дезинфицирующие растворы готовят на питьевой воде комнатной температуры или
подогретой до (50 +/- 1) °C.
После подсушивания контаминированные изделия погружают в раствор испытываемого средства, заполняя им все каналы и полости изделий, избегая образования воздушных пробок. Инструменты, имеющие замковые части, погружают раскрытыми, предварительно сделав ими в растворе ДС несколько рабочих движений для лучшего проникновения раствора в труднодоступные участки изделия в области замка. Толщина слоя раствора средства над изделиями должна быть не менее 1 см. Параллельно контаминированные контрольные изделия погружают в воду.
Через определенное время (от 15 до 120 мин.) изделия извлекают из раствора и марлевой салфеткой размером 5 x 5 см, пропитанной нейтрализатором, с поверхности изделия делают смывы, салфетку помещают в пробирку с 10 мл того же нейтрализатора на 5 мин., затем переносят ее в пробирку со стерильной питьевой водой и встряхивают с бусами в течение 5 - 10 мин. Для контроля эффективности обеззараживания делают посев смывной жидкости по 0,1 мл на поверхность агаровой питательной среды, а салфетку помещают в бульон. Канал изделия промывают нейтрализатором, и смывную жидкость засевают по 0,1 мл на скошенную плотную питательную среду в 3 - 5 пробирок. Посевы выдерживают в термостате при температуре (37 +/- 1) °C в течение 21 суток. Учет предварительных результатов проводят через 10 - 14 суток и окончательных - через 21 сутки.
|
